Manuale d’uso / di manutenzione del prodotto SP HP del fabbricante GE
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Instructions 71-7149-00 AN HiTrap ion exchange columns GE Healthcare HiTrap SP HP , 1 ml and 5 ml HiTrap Q HP , 1 ml and 5 ml HiT rap ™ SP HP an d Hi T rap Q HP a re pre pac ked , rea dy to us e cat.
p. 2 Code No. Designation No. su pplied 17 - 1151 - 01 Hi T rap S P HP 5 x 1 ml 17 - 1152-01 HiTrap SP HP 5 x 5 m l 17 - 1153- 01 Hi T rap Q H P 5 x 1 ml 17 - 1154 -01 Hi T rap Q H P 5 x 5 ml Connectorkit Connectors supplied Usage No.
p. 3 1. Description Media properties SP Seph arose ™ H igh P er for ma nce an d Q Sep ha rose H igh P er fo rma nce are s tr ong ca ti on an d st ron g ani on ex cha nge rs re sp ec tiv ely . Bot h rem ain cha rge d and m ain tai n high c apa cit y over b roa d pH ra nge s.
p. 4 Ta b l e 1 . Hi T r ap SP HP a nd Hi T rap Q HP c olu mns c hara ct eri st ic s Co lum n vol ume s 1 ml o r 5 ml Co lum n dim ens io ns 0.7 × 2.5 c m (1 ml ) and 1 .6 × 2.5 c m (5 m l) T ota l ion ic ca pac ity 0.14– 0.20 m mo l (C l – )/m l me di um (Q) 0.
p. 5 2. Selection of ion exchanger and conditions Io n exch ang e chr oma tog rap hy is b ase d on a dso rpt io n and re ver sib le bi ndi ng of ch arg ed sa mpl e mo lec ule s to op pos ite ly ch arg ed gro ups at ta che d to an in so lub le ma tr ix .
p. 6 Strategy 1. Binding and elution of all sample components Bi ndi ng is a chi eved b y cho os ing a s tar t b uf fe r wit h a lo w pH for H iTrap SP HP or a h igh p H for Hi Trap Q HP . T he io nic s tre ngh t sho uld b e kep t as lo w as po ssi bl e to all ow al l com po nent s to b in d to th e ion ic ex chan ge (< 5 mS/cm ) .
p. 7 Th e buf fe ri ng io n sho uld c arr y th e sam e cha rge a s the i on ex cha nge g rou p an d sho uld h ave a pK a wit hin 0 .5 pH u nit s of t he pH u se d in th e sep ara ti on. Bu f feri ng io ns of o pp osi te cha rge m ay ta ke pa r t in th e ion e xch ang e pro ces s and caus e local distu rbance s in pH.
p. 8 Ta b l e 3 . Buf fers for anion exchange chromatography. pH in ter va l Sub st anc e Co nc . (mM ) Co unte r-io n pK a (25 ° C ) 1 4.3–5.3 N-Methylpiperazine 20 Cl - 4. 75 4.8–5.8 Piperazine 20 Cl - or HC OO - 5.33 5. 5– 6.5 L-His ti din e 20 Cl - 6.
p. 9 Fig 3. Recommended buffer substances for anion exchange chromatography. Th e colu mn s can be o pe rate d wi th a sy rin ge, p eri st alt ic pu mp o r a chromatography system. 3. Operation Buff er preparation Wate r and c hem ica ls us ed fo r buf fe r pre par at ion s hou ld be o f hig h pur ity .
p. 10 Ta b l e 4 . Prep ack ed col umn s for d esa lt ing a nd bu f fer e xcha ng e. Code No Column Loading volume Elution volume Comments Application 17 - 1408 -01 Hi T rap 0.1– 1. 5 ml 1. 3– 4.0 m l Pr epa cke d wit h For de sa lti ng an d bu f fer De sal ti ng Se pha de x™ G-25 exch ang e of p rote in Super f ine.
p. 11 Purifi cation 1. Fi ll th e syr ing e or p ump tu bin g wi th s tar t b uf fer ( lo w io nic s tre ngt h ). Rem ove t he s top per a nd co nne ct t he co lum n to th e syr ing e ( wit h th e pro vid ed a dapt or) , “dro p to dro p” to av oid i ntr odu ct ing a ir in to th e colum n.
p. 12 Note: If a P1-pu mp is u sed a m ax f lo w rat e of 1 –3 ml/m in ca n be r un on a Hi T r ap 1 ml co lu mn pa cked w it h Sep har ose H igh P er for ma nce media.
p. 13 Further optimization Th e reco mme nd ati ons g ive n abo ve wi ll gi ve a sou nd b asi s for de vel opi ng a n ef f ici ent p uri f ica tio n st ep.
p. 14 Elution with stepwise ionic strength gradients Step wi se el uti on i s the s equ ent ia l use o f the s ame b uf fe r at di f fere nt io nic st ren gt hs. I t is te chn ical ly si mpl e and f as t, an d is su ita ble f or syr in ge op era tio n.
p. 15 – A p eri st alt ic pu mp an d a gra die nt mix er e.g . pu mp P- 1, gra die nt mix er GM- 1 . – A o ne pu mp sy ste m, e.g . ÄK T A pr ime ™ plus. – A t wo pu mp sy st em, e. g FPLC or ÄK TA. 1. Choose s tarting conditions as outlined under Optimizing star ting conditions.
p. 16 Fig 4. Bind in g cap aci ty of hu man I gG , HSA an d hum an t ran sfe rr in at d if fe rent p H´s on Hi Trap Q HP , 1 m l. 4. Ap pl y the s amp le s olu tio n to th e col umn w it h a pum p or a syr in ge, at a f low r ate e qua l to th e fl ow ra te to b e use d in t he pu rif i cat ion m et hod .
p. 1 7 7. Scaling up For q uic k scal e- up of pu ri f icat io ns ( bac k pre ssu re wil l inc rea se ), t wo o r th ree Hi T rap i on ex chan ge co lum ns of t he sa me ty pe ca n be co nne ct ed in s er ies .
p. 18 Rel ate d pro duc t s No. S upp lie d Co de No . Hi T rap I EX Se le ct ion K it 7 x 1 ml 17 - 60 02- 33 Hi T rap D es alt in g 5 x 5 ml 17 - 1408 -01 Hi T rap D es alt in g 100 x 5 m l* 11-0 00.
p. 19 Realated literature Ion Exchange Chr omatography & Chromatofocusing Handbook, Principles and Methods 1 11 - 0004-21 Io n Exc han ge Co lu mns a nd Me di a, Sel ec ti on Gu ide 1 18 - 1127 -3.
HiTrap, Sepharose, Sephadex, FPLC, ÄKT A , ÄKT Aprime, ÄKTAdesign, Dr op Design, NICK, NAP , HiPrep and HiLoad are trademarks of GE Healthcare companies.
Un punto importante, dopo l’acquisto del dispositivo (o anche prima di acquisto) è quello di leggere il manuale. Dobbiamo farlo per diversi motivi semplici:
Se non hai ancora comprato il GE SP HP è un buon momento per familiarizzare con i dati di base del prodotto. Prime consultare le pagine iniziali del manuale d’uso, che si trova al di sopra. Dovresti trovare lì i dati tecnici più importanti del GE SP HP - in questo modo è possibile verificare se l’apparecchio soddisfa le tue esigenze. Esplorando le pagine segenti del manuali d’uso GE SP HP imparerai tutte le caratteristiche del prodotto e le informazioni sul suo funzionamento. Le informazioni sul GE SP HP ti aiuteranno sicuramente a prendere una decisione relativa all’acquisto.
In una situazione in cui hai già il GE SP HP, ma non hai ancora letto il manuale d’uso, dovresti farlo per le ragioni sopra descritte. Saprai quindi se hai correttamente usato le funzioni disponibili, e se hai commesso errori che possono ridurre la durata di vita del GE SP HP.
Tuttavia, uno dei ruoli più importanti per l’utente svolti dal manuale d’uso è quello di aiutare a risolvere i problemi con il GE SP HP. Quasi sempre, ci troverai Troubleshooting, cioè i guasti più frequenti e malfunzionamenti del dispositivo GE SP HP insieme con le istruzioni su come risolverli. Anche se non si riesci a risolvere il problema, il manuale d’uso ti mostrerà il percorso di ulteriori procedimenti – il contatto con il centro servizio clienti o il servizio più vicino.
